Serum biomarkers in patients with unilateral or bilateral active pulmonary tuberculosis: Immunological networks and promising diagnostic applications.

The present observational study was designed to characterize the integrative profile of serum soluble mediators to describe the immunological networks associated with clinical findings and identify putative biomarkers for diagnosis and prognosis of active tuberculosis. The study population comprises 163 volunteers, including 84 patients with active pulmonary tuberculosis/(TB), and 79 controls/(C). Soluble mediators were measured by multiplexed assay. Data analysis demonstrated that the levels of CCL3, CCL5, CXCL10, IL-1ß, IL-6, IFN-γ, IL-1Ra, IL-4, IL-10, PDGF, VEGF, G-CSF, IL-7 were increased in TB as compared to C. Patients with bilateral pulmonary involvement/(TB-BI) exhibited higher levels of CXCL8, IL-6 and TNF with distinct biomarker signatures (CCL11, CCL2, TNF and IL-10) as compared to patients with unilateral infiltrates/(TB-UNI). Analysis of biomarker networks based in correlation power graph demonstrated small number of strong connections in TB and TB-BI. The search for biomarkers with relevant implications to understand the pathogenetic mechanisms and useful as complementary diagnosis tool of active TB pointed out the excellent performance of single analysis of IL-6 or CXCL10 and the stepwise combination of IL-6 â†’ CXCL10 (Accuracy = 84 %; 80 % and 88 %, respectively). Together, our finding demonstrated that immunological networks of serum soluble biomarkers in TB patients differ according to the unilateral or bilateral pulmonary involvement and may have relevant implications to understand the pathogenetic mechanisms involved in the clinical outcome of Mtb infection.

Systemic Immunological changes in patients with distinct clinical outcomes during Mycobacterium tuberculosis infection.

BACKGROUND: The lung lesions in an individual infected with tuberculosis (TB) are surprisingly variable and independent of each other. However, there is no circulating biomarker yet able to segregate patients according to the extent of lung lesions. MATERIALS AND METHODS: In this study, the phenotypic and functional profile of leukocytes of patients with active pulmonary tuberculosis (TB) and controls (CO) were fully scrutinized by immunophenotyping assays and in vitro short-term whole blood culture. The TB group was subdivided according to the extent of lung lesions as unilateral (UNI) and bilateral (BI). RESULTS: The results show that TB group display an altered leukocyte profile in the peripheral blood with significant lower counts of NK-cells, CD3+CD56+CD16+/- NKT-cells, CD4+T-cells, CD19+B-cells when compared to CO. Increased CD4+T-cells and CD8+T-cell activation was observed by the upregulation of activation markers (HLA-DR) as well as of chemokine receptors (CCR2, CCR3, and CXCR4). In addition, TB group presented a significant decrease proportion of CD14LowCD16+ monocytes despite the increase in HLA-DR expression. Regarding the severity of the disease, in the BI group a reduction in frequency of CD19+CD5+ B-cells and expression of HLA-DR in CD14LowCD16+ monocytes was observed. Furthermore, the extent of lung lesions influences the production of molecules as observed by significantly larger production of IL-4 by neutrophils, total T-cells, CD4+T-cells, CD8+T-cells and CD19+B-cells in UNI as compared to BI. By contrast, in BI group the frequency of high producers of both IL-17+CD4+T-cells and IL-17+CD8+T-cells were significantly increased than UNI, suggesting the deleterious role of these subsets during active pulmonary Mtb infection. CONCLUSION: The immunophenotypic characterization of unilateral and bilateral active TB performed in the present study indicates that the extent of lung lesion could be associated with a fine-tuning between immunological responses during untreated Mtb infection.

O abandono do tratamento da tuberculose sob a perspectiva dos gerentes de diferentes centros de saúde de Belo Horizonte-MG, Brasil / Abandonment of tuberculosis treatment in the perspective of health centers managers in Belo Horizonte-MG, Brazil / El abandono del tratamiento de tuberculosis en la perspectiva de directores de centros de salud de Belo Horizonte-MG, Brasil

O Programa Nacional de Controle da Tuberculose requer a organização e adequado funcionamento dos serviços de saúde para o cumprimento do princípio de integralidade do Sistema Único de Saúde, um dos pilares para o controle da doença. Este estudo qualitativo objetivou investigar, sob a perspectiva de gerentes de Centros de Saúde de Belo Horizonte-Minas Gerais, aspectos relativos ao funcionamento dos serviços que coordenam face ao abandono do tratamento da tuberculose e a viabilidade de cumprir as diretrizes do Programa de Controle da doença. Os dados foram coletados através de entrevistas semiestruturadas e interpretados pela Análise Temática de Conteúdo. Os relatos indicam que os serviços ainda não cumprem a perspectiva da integralidade, requerendo melhor organização e processos de educação permanente das equipes para enfrentar o abandono e elaborar novas alternativas para ampliar a adesão e conclusão do tratamento.

The Brazilian National Tuberculosis Control Program requires the organization and proper functioning of health services to meet the principle of intregality, one of the pillars of the Brazilian Unified Health System and the most important orientation for tuberculosis control. This study aims to investigate, in the perspective of nine managers of health centers in Belo Horizonte, MG, Brazil, aspects concerning the functioning of the services they coordinated, associated to noncompliance with tuberculosis treatment and the feasibility of meeting Program guidelines. Data were collected through semi-structured interviews and interpreted by means of thematic content analysis. Reports indicate that health services did not comply with the integrality orientation, requiring better organization and continuing education processes of health professionals to deal with abandonment and to develop new alternatives to improve treatment adherence and compliance.

El Programa Nacional de Control de la Tuberculosis en Brasil requiere la organización y funcionamiento de los servicios de salud para cumplir con el principio de la integralidad del Sistema Único de Salud, uno de los pilares para el control de la enfermedad. Este estudio tuvo como objetivo investigar desde la perspectiva de nueve administradores de centros de salud en Belo Horizonte, Minas Gerais, Brasil los aspectos relativos al funcionamiento de los servicios que coordinan asociados con el abandono del tratamiento de la tuberculosis y la viabilidad para cumplir con las directrices del Programa. Los datos fueron recolectados a través de entrevistas semi-estructuradas e interpretados por análisis de contenido temático. Los informes indican que los servicios no cumplen con la perspectiva de la integralidad y requieren una mejor organización así como de procesos de formación permanente de profesionales de la salud para hacer frente al abandono y desarrollar nuevas alternativas para aumentar la adherencia y la finalización del tratamiento.

The use of IgG antibodies in conventional and non-conventional immunodiagnostic tests for early prognosis after treatment of Chagas disease.

Treatment success of chronically infected Chagas disease patients is laborious and a positive prognosis often is made only after repetitive serological and/or parasitological examinations with continuous negative results. Recently, we have developed a non-conventional flow-cytometric method in order to detect immunoglobulin G antibodies against live trypomastigote forms of Trypanosoma cruzi and showed its usefulness in the prognosis of treatment success. In the present study, we investigated the performance of flow-cytometric anti-live trypomastigote IgG antibodies (FC-ALTA) and flow-cytometric anti-fixed epimastigote IgG antibodies (FC-AFEA), as well as conventional serological methods, for early monitoring of benznidazole treated Chagas disease patients, e.g. 5years after treatment. The analysis of individual FC-ALTA reactivity along the titration curve before and after treatment, we were able to show, that between 4% and 13% of treated patients under evaluation presented with reduced serological reactivity and segregated from the other patient groups. Similar results were obtained with semi-quantitative, conventional indirect hemagglutination or indirect immunofluorescence. Our data therefore suggest that the combined use of conventional and non-conventional serological methods could provide more suitable cure criteria in early post-therapeutic prognosis of Chagas disease.

Applicability of an optimized non-conventional flow cytometry method to detect anti-Trypanosoma cruzi immunoglobulin G for the serological diagnosis and cure assessment following chemotherapeutic treatment of Chagas disease.

One of the challenges on immunodiagnostic of Chagas disease in endemic areas has been the search for more practical and safe antigenic preparation that provides tests with higher sensitivity and specificity, with low cross-reactivity. A new approach using fixed Trypanosoma cruzi epimastigotes to detect IgG reactivity was investigated previously. In order to continue this investigation, this study aimed at optimizing the flow cytometry-based method to the diagnosis of Chagas disease patients after specific chemotherapy. To achieve our goal, serum samples from 93 subjects - 52 adults chronically infected by T. cruzi, and 41 uninfected controls were tested by flow cytometry. Secondly, serum samples from patients Treated Cured and Treated Uncured from Chagas disease were also tested to evaluate the potential of the method on assessing cure. After establishing the ideal serum dilution and cut off, 121 serum samples from patients with other endemic infections were tested to check cross-reactivity. The results showed that parasite staining with Evan's blue dye eliminated debris, allowing trustworthy analysis of anti-fixed epimastigote IgG reactivity. The applicability of the method to diagnose Chagas disease was confirmed by the high sensitivity (98.1%) and specificity (100%) found. This method also contributed for post-therapeutic assessment of cure, identifying 94.1% of Treated Uncured and 83.3% of Treated Cured patients. Cross-reactivity was observed in a very low number (6.7%). On the whole, these data highly recommend the use of anti-fixed T. cruzi epimastigote IgG reactivity by flow cytometry to the diagnosis and cure monitoring of Chagas disease in endemic areas.

Tuberculose Pulmonar: estudo do abandono do tratamento na visão de profissionais de saúde de Belo Horizonte, MG / Pulmonary TB: study discontinuation of treatment in the health professionals' view of Belo Horizonte, MG

A tuberculose é um importante problema de saúde pública no que se refere à mortalidade e morbidade do mundo. O Brasil é o décimo quinto país em número de casos entre os 22 países responsáveis por 80% do total de casos de tuberculose no mundo. Apesar de todas as ações governamentais para o combate da doença como medicações gratuitas, orientações aos pacientes e a implantação do tratamento supervisionado, ocorre uma alta incidência de abandono do tratamento, o que torna desfavoráveis os índices atuais do quadro epidemiológico de tuberculose no país. Assim, atualmente, a tuberculose é considerada o mais significativo problema na prática médica em comparação com outros desafios da área.Diversos estudos abordam o problema da adesão e/ou abandono do tratamento e o cumprimento das diretrizes do Programa Nacional de Controle da Tuberculose (PNCT). A literatura aponta vários aspectos que contribuem para o abandono, bem como diversos fatores que podem promover uma maior adesão ao tratamento. Contudo, há ainda lacunas relevantes a serem investigadas, uma delas, caracterizada pela ação dos profissionais de saúde e estruturados serviços de saúde para o cumprimento do PNCT. Neste contexto, o presente estudo tevepor objetivo analisar o abandono do tratamento por pacientes com tuberculose pulmonar na visão de nove gerentes de diferentes Centros de Saúde de três regiões administrativas de saúde de Belo Horizonte, Minas Gerais, identificadas como locais onde o fenômeno é mais freqüente...

Optou-se por um estudo qualitativo através da abordagem da pesquisa estratégica,utilizando-se a entrevista semi-estruturada como instrumento de investigação. A Análise de Conteúdo, segundo Bardin, possibilitou organizar os relatos dos entrevistados e identificar as categorias mais relevantes e diversas subcategorias, sistematizadas em oito grandes eixos temáticos: (1) organização do Serviço de Saúde em relação ao registro e acompanhamento dos pacientes com tuberculose; (2) o Sistema Único de Saúde (SUS), as equipes de saúde da família e os processos de atendimento e tratamento dos pacientes; (3) o abandono do tratamento; (4) estigma e preconceito em relação à doença e ao paciente; (5) comportamento dos pacientes e de suas famílias em relação à doença; (6) propostas ou perspectivas para solucionar problemas; (7) material educativo e ações de educação em saúde; (8) reflexos das políticas públicas na estruturação do serviço e intercâmbio de experiências. Em geral, as causas do abandono na visão dos gerentes se referem a problemas pessoais dos pacientes, cujo perfil é associado a desestrutura familiar, vícios, complicações psicológicas e dificuldades econômicas. Como agravante são apontados estigmas quanto à doença pelo próprio paciente enas atitudes de alguns profissionais de saúde e familiares dos mesmos. Com menor importância são também associados como causa do abandono a falta de infraestrutura dos serviços e de alguns especialistas nas equipes multidisciplinares, aspectos dos próprios serviços de saúde. Compreender os motivos do abandono possibilita sugerir e elaborar alternativas para ampliar a adesão e conclusão do tratamento, como políticas públicas específicas, ações de educação em saúde e de mobilização social, de forma que a assistência seja integrada à família e aos profissionais de saúde...

Tuberculose Pulmonar: estudo do abandono do tratamento na visão de profissionais de saúde de Belo Horizonte, MG

A tuberculose é um importante problema de saúde pública no que se refere à mortalidade e morbidade do mundo. O Brasil é o décimo quinto país em número de casos entre os 22 países responsáveis por 80% do total de casos de tuberculose no mundo. Apesar de todas as ações governamentais para o combate da doença como medicações gratuitas, orientações aos pacientes e a implantação do tratamento supervisionado, ocorre uma alta incidência de abandono do tratamento, o que torna desfavoráveis os índices atuais do quadro epidemiológico de tuberculose no país. Assim, atualmente, a tuberculose é considerada o mais significativo problema na prática médica em comparação com outros desafios da área.Diversos estudos abordam o problema da adesão e/ou abandono do tratamento e o cumprimento das diretrizes do Programa Nacional de Controle da Tuberculose (PNCT). A literatura aponta vários aspectos que contribuem para o abandono, bem como diversos fatores que podem promover uma maior adesão ao tratamento. Contudo, há ainda lacunas relevantes a serem investigadas, uma delas, caracterizada pela ação dos profissionais de saúde e estruturados serviços de saúde para o cumprimento do PNCT. Neste contexto, o presente estudo tevepor objetivo analisar o abandono do tratamento por pacientes com tuberculose pulmonar na visão de nove gerentes de diferentes Centros de Saúde de três regiões administrativas de saúde de Belo Horizonte, Minas Gerais, identificadas como locais onde o fenômeno é mais freqüente.

Optou-se por um estudo qualitativo através da abordagem da pesquisa estratégica,utilizando-se a entrevista semi-estruturada como instrumento de investigação. A Análise de Conteúdo, segundo Bardin, possibilitou organizar os relatos dos entrevistados e identificar as categorias mais relevantes e diversas subcategorias, sistematizadas em oito grandes eixos temáticos: (1) organização do Serviço de Saúde em relação ao registro e acompanhamento dos pacientes com tuberculose; (2) o Sistema Único de Saúde (SUS), as equipes de saúde da família e os processos de atendimento e tratamento dos pacientes; (3) o abandono do tratamento; (4) estigma e preconceito em relação à doença e ao paciente; (5) comportamento dos pacientes e de suas famílias em relação à doença; (6) propostas ou perspectivas para solucionar problemas; (7) material educativo e ações de educação em saúde; (8) reflexos das políticas públicas na estruturação do serviço e intercâmbio de experiências. Em geral, as causas do abandono na visão dos gerentes se referem a problemas pessoais dos pacientes, cujo perfil é associado a desestrutura familiar, vícios, complicações psicológicas e dificuldades econômicas. Como agravante são apontados estigmas quanto à doença pelo próprio paciente enas atitudes de alguns profissionais de saúde e familiares dos mesmos. Com menor importância são também associados como causa do abandono a falta de infraestrutura dos serviços e de alguns especialistas nas equipes multidisciplinares, aspectos dos próprios serviços de saúde. Compreender os motivos do abandono possibilita sugerir e elaborar alternativas para ampliar a adesão e conclusão do tratamento, como políticas públicas específicas, ações de educação em saúde e de mobilização social, de forma que a assistência seja integrada à família e aos profissionais de saúde.

Non-conventional flow cytometry approaches to detect anti-Trypanosoma cruzi immunoglobulin G in the clinical laboratory.

We have recently developed a flow cytometric approach to detect anti-live trypomastigote and anti-fixed epimastigote IgG antibodies (FC-ALTA and FC-AFEA) in sera from individuals infected by Trypanosoma cruzi. Here, we present the first evaluation of the applicability of FC-AFEA-IgG as a diagnostic tool for Chagas disease. Performance analysis demonstrated that FC-AFEA-IgG has a sensitivity of 82% and a specificity of 100%. The assessment for prognosis performed by FC-ALTA-IgG1 and FC-AFEA-IgG, after classification of chagasic patients as belonging to indeterminate (IND), cardiac (CARD) or digestive (DIG) clinical forms, showed that most of IND have higher amounts of IgG than individuals' carrying CARD or DIG Chagas disease. FC-AFEA-IgG was also evaluated as a method to monitor chemotherapy efficacy in individuals classified into three distinct categories: not treated (NT), treated but not cured (TNC), and treated and cured (TC). Performance analysis demonstrated that FC-AFEA-IgG has an extraordinary capacity as a serological criterion to assess cure after therapeutic intervention in Chagas disease. These results represent a great advance in the application of serological techniques for clinical investigations on Chagas disease, and they clearly define new directions and perspectives. We intend to continue this field research focusing our attention on the influence of the degree of clinical damage on the FC-ALTA-IgG1 and FC-AFEA-IgG reactivity.